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蛋白表達實驗的時，有時候?qū)嶒灂X得參考實驗方法和克隆的蛋白基因序列wan全沒有問題，但蛋白電泳就是沒有結(jié)果。下面讓我們一起來看看蛋白表達的常見問題有哪些吧！1、載體構(gòu)建錯誤，很多克隆新人經(jīng)常弄錯讀碼框。比如Qiagen的pQE系列載體，其克隆位點常有一兩個堿基的區(qū)別；另外有些酶產(chǎn)生粘端有些酶產(chǎn)生平端，這些都容易導(dǎo)致讀碼框錯誤，從而表達不出來。2、宿主菌選擇不當(dāng)，不同的宿主菌其基因型是不一樣的。有些經(jīng)過特殊修飾的載體，或者特殊用途的載體，或者有特殊啟動子的載體，必須選擇合適的宿...

你知道PCR反應(yīng)體系主要包含那些嗎？讓我們一起來看看吧！一、模板（template)模板即擴增用的DNA，可以是任何來源DNA(如基因組DNA、質(zhì)粒DNA等)或RNA（如總RNA、mRNA、tRNA、rRNA、病毒RNA等），但必須符合兩個條件：一是純度必須較高，二是濃度不能太高以免抑制。模板是待擴增的目的基因或特異片段，如診斷病人是否攜帶有突變基因時，其模板就是提取的病人血液中的DNA或RNA片段。PCR對模板DNA的純度不要求很高，但應(yīng)盡量不含有對PCR反應(yīng)有抑制作用的雜...

你知道PCR技術(shù)的基本原理、各步驟的目的是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、PCR技術(shù)基本原理PCR是一種選擇性體外快速擴增DNA片段的方法。在體外以類似于細(xì)胞內(nèi)DNA的半保留復(fù)制過程，以擬擴增的模板DNA分子，與模板DNA互補的寡核苷酸引物、DNA聚合酶、4種dNTP及適合的緩沖體系組成的反應(yīng)體系，經(jīng)過重復(fù)地變性一退火一延伸三步，擴增新的目的DNA鏈，這個過程通過控制反應(yīng)體系的溫度來實現(xiàn)。PCR包含下列三步反應(yīng)：1、變性(denaturation)將反應(yīng)體系混合物經(jīng)加熱至94...

免疫組化實驗看似容易，但真想把結(jié)果做漂亮，還是需要花上很長一段時間去積累和摸索經(jīng)驗。一味按照網(wǎng)上操作流程來做，結(jié)果往往并不理想，最終結(jié)果未能達到預(yù)期的效果。那么如何選擇免疫組化實驗中的一抗呢？讓我們一起來看看吧！一、單克隆和多克隆抗體的選擇存在于抗原表面的，決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團稱為抗原決定簇，又稱抗原表位。一個抗原可以有一種或多種不同的抗原表位，每種表位只有一種抗原特異性。用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動物，可刺激機體多個B細(xì)胞克隆產(chǎn)生針對多種抗原表位的抗體，就是...

你知道細(xì)胞胞內(nèi)染色操作流程是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、細(xì)胞計數(shù)將培養(yǎng)好的細(xì)胞收集于15mL離心管并計數(shù)；500g離心4min，去上清。二、制備單細(xì)胞懸液將收集的細(xì)胞用1mL0.5%BSA/PBS溶液重懸，400g離心3min，去上清，重復(fù)2次；用0.5%BSA/PBS溶液重懸細(xì)胞至濃度1x106個細(xì)胞/mL，分配到96孔板中，每孔100μl細(xì)胞懸液，400g離心5min去上清。三、固定每孔加入100μl細(xì)胞固定劑重懸細(xì)胞，2-8°孵育20min。四、洗滌400g離心5m...