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022-66387942簡要描述:293細胞專用轉(zhuǎn)染試劑盒——PolyTool™ 293-Fit Transfection Reagent Kit,適用于HEK293細胞及其他HEK293細胞的高密度懸浮培養(yǎng)、DNA瞬時轉(zhuǎn)染及蛋白表達。
一、產(chǎn)品簡介
293細胞專用轉(zhuǎn)染試劑盒——PolyTool™ 293-Fit Transfection Reagent Kit,適用于HEK293細胞及其他HEK293細胞的高密度懸浮培養(yǎng)、DNA瞬時轉(zhuǎn)染及蛋白表達。
PolyTool™ 293-Fit Transfection Reagent Kit適用范圍:HEK293細胞懸浮培養(yǎng)、其他HEK293細胞的高密度懸浮培養(yǎng)、DNA瞬時轉(zhuǎn)染及蛋白表達。
該試劑盒包括下列試劑:
(1)PolyTool™ 293 Transfection Reagent (懸浮293細胞轉(zhuǎn)染試劑);
(2)PolyTool™ 293 Medium(化學限定293 細胞無血清細胞培養(yǎng)液);
(3)PolyTool™ 293 B(化學成分限定的、高濃度營養(yǎng)成分的補料 1);
(4)PolyTool™ 293 C(化學成分限定的、高濃度營養(yǎng)成分的補料 2)。
PolyTool™ 293 Transfection Reagent 配合PolyTool™ 293 Medium、PolyTool™ 293 B及PolyTool™ 293 C使用,可大幅度提高重組蛋白的表達產(chǎn)量。
二、操作流程
1.細胞接種(以25mL體系為例):
根據(jù)細胞狀態(tài),選擇合適的接種密度,建議接種密度為 1×106 cells/mL,待第二天細胞密度達到2×106 cells/mL左右,活性大于95%時進行轉(zhuǎn)染。
2.瞬時轉(zhuǎn)染:
建議質(zhì)粒(μg)與試劑(μL)參考配比區(qū)間為1:3~1:5之間。具體步驟如圖1所示(以1:4為例):
(1)使用本樣品前渦旋混勻5秒,使用1.25 mLPolyTool™ 293 Medium稀釋100 μL的轉(zhuǎn)染試劑,并吹打均勻;
(2)使用1.25 mL PolyTool™ 293 Medium稀釋25 μg質(zhì)粒,并吹打混勻;
(3)將(1)和(2)所述溶液混合均勻;
(4)將(3)所述混合溶液室溫靜置孵育10~15 min;
(5)將(4)中的復合物溶液加入25 mL的細胞培養(yǎng)體系中,放回搖床中,在37 ℃、震蕩速度120 rpm下繼續(xù)培養(yǎng)。
3.產(chǎn)物表達與檢測:
(1)轉(zhuǎn)染24小時、72小時、120小時、168小時后加入3%(75 mL/100mL)PolyTool™293 B,0.3%(75 μL/25 mL)PolyTool™ 293 C。
(2)轉(zhuǎn)染后第5~7天測定產(chǎn)物表達量。多數(shù)蛋白的合成在轉(zhuǎn)染后第5天左右可達到最高值,客戶可根據(jù)細胞狀態(tài)及表達量選擇適宜的收獲時間。
圖1 細胞轉(zhuǎn)染示意圖
293細胞專用轉(zhuǎn)染試劑盒——PolyTool™ 293-Fit Transfection Reagent Kit代理——天津益元利康生物科技有限公司,成立于2018年,坐落于天津經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)。公司產(chǎn)品線涉及細胞與基因治療、免疫學、分子生物學、細胞生物學等多個方向,專注于生命科學試劑、耗材、細胞、儀器等產(chǎn)品銷售,經(jīng)營的品牌主要有:ThermoFisher、Sigma、Qiagen、EZBioscience、ZYMO Research、MedKoo、Abcam等等。我們提供質(zhì)優(yōu)價美的產(chǎn)品、及時到位的服務,努力成長為生命科學和生物技術(shù)企業(yè)的優(yōu)質(zhì)供應商。