歡迎來到天津益元利康生物科技有限公司網(wǎng)站!
022-66387942方法一:
1. 根據(jù)樣品重量(1g 樣品加入3.5ml 提取液,可根據(jù)材料不同適當加入),準備提取液放在冰上。
2. 樣品放在研缽中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上靜置(3-4 小時)。
3. 用離心機離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
4. 提取上清夜,樣品制備完成。
5. 蛋白質(zhì)提取液:300ml
1Mtris-HCl(PH8) 45ml
甘油(Glycerol)75ml
聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g
這種方法針對SDS-PAGE,垂直板電泳!
方法二:
用三氯醋酸—丙酮沉淀法,這種方法針對雙向電泳,雜質(zhì)少,離子濃度小的特點!當然單向電泳也同樣適用,只是電泳的條帶會減少!
1. 在液氮中研磨葉片
2. 加入樣品體積3 倍的提取液在-20℃的條件下過夜,然后離心(4℃8000rpm以上1 小時)棄上清。
3. 加入等體積的冰浴丙酮(含0.07%的β-巰基乙醇),搖勻后離心(4℃8000rpm以上1 小時),然后真空干燥沉淀,備用。
4. 上樣前加入裂解液,室溫放置30 分鐘,使蛋白充分溶于裂解液中,然后離心(15℃8000rpm 以上1 小時或更長時間以沒有沉淀為標準),可臨時保存在4℃待用。
5. 用Brandford 法定量蛋白,然后可分裝放入-80℃備用。
提取液:含10%TCA 和0.07%的β-巰基乙醇的丙酮
裂解液:2.7g 尿素0.2gCHAPS 溶于3ml 滅菌的去離子水中(終體積為5ml),使用前再加入1M 的DTT65ul/ml。
上一篇:BCA法實驗原理、操作步驟
下一篇:LNA在基因檢測中的應用