細胞轉染是指將外源性基因導入到細胞內的技術。那你知道細胞轉染是如何分類的嗎?讓我們一起來看看吧!
一、根據導入的核酸存在于宿主細胞的時間長短,可分為瞬時轉染和穩(wěn)定轉染。
瞬時轉染(transient transfection):指將精心構建的質粒通過一定方式導入哺乳動物細胞內,其中所攜帶的外源基因不與細胞內基因組整合。
細胞中外源基因的瞬時轉染表達時間有限,通常僅持續(xù)數日,直至外源基因由于細胞分裂過程中的各種因素而喪失。此方法常用于啟動子和其他調控元件的研究。
目前,憑借多種轉染試劑的創(chuàng)新,已能在哺乳動物細胞中實現瞬時轉染,以生產具有適當折疊和翻譯后修飾的重組蛋白。
穩(wěn)定轉染(Stable transfected):外源DNA被整合到細胞基因組中或作為附加質粒保留在細胞內。與瞬時轉染不同,穩(wěn)定轉染能夠與宿主基因組整合,因此轉染細胞及其后代細胞的基因組中同時保留了轉染的DNA。
由于穩(wěn)定轉染效率較低,因此選擇有效的轉染策略和篩選方法至關重要。
二、根據轉染方式可分為化學、生物和物理方法。
細胞由帶有負電荷的磷脂雙分子層構成,對于大分子物質而言,其形成了不可透過的屏障,例如DNA和RNA的磷酸骨架,它們也帶有負電荷。為了讓核酸穿過細胞膜,研究人員開發(fā)了多種技術,大致分為三類:
化學方法:利用載體分子包裹核酸,使其呈現中性電荷或正電荷。例如陽離子脂質體方法、磷酸鈣共沉淀法、其他陽離子物質介導等技術。
生物方法:利用基因工程病毒將非病毒基因轉染至細胞中。目前較常見的是各種病毒介導的轉染技術。
物理方法:通過在細胞膜表面產生瞬時的孔道,導入DNA。例如電穿孔法、顯微注射法。
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