国产精品久久久久久免费软件_亚洲无人区码一码二码三码四码_日韩精品久久久肉伦网站_亚洲日韩一页精品发布

歡迎來到天津益元利康生物科技有限公司網(wǎng)站!

022-66387942
關(guān)鍵詞搜索:尿素測(cè)定試劑盒,MedKoo代理,Permagen磁架
Technical articles技術(shù)文章
首頁(yè) > 技術(shù)文章 > abclonal愛博泰克SARS-CoV-2 N蛋白多抗(A20607)現(xiàn)貨供應(yīng)

abclonal愛博泰克SARS-CoV-2 N蛋白多抗(A20607)現(xiàn)貨供應(yīng)

 更新時(shí)間:2024-04-16    點(diǎn)擊量:421

產(chǎn)品名稱:abclonal愛博泰克SARS-CoV-2 N蛋白多抗(A20607)現(xiàn)貨供應(yīng)

產(chǎn)品貨號(hào):A20607

產(chǎn)品品牌:abclonal愛博泰克

產(chǎn)品背景:將正鏈病毒基因組RNA包裝成螺旋核糖核衣殼(RNP),通過與病毒基因組和膜蛋白M的相互作用,在病毒粒子組裝過程中發(fā)揮重要作用??赡芡ㄟ^結(jié)合宿主 SMAD3 調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。

實(shí)驗(yàn)流程:

蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)步驟:

1、樣品制備

1)細(xì)胞收集

a. 貼壁培養(yǎng)細(xì)胞收集

用細(xì)胞刮刮下細(xì)胞或用胰酶消化處理后,400×g,離心5 min,棄上清;用適量冰PBS溶液將離心后細(xì)胞沉淀重懸,4℃,400×g 離心5min,棄上清,重復(fù)清洗步驟一次收集細(xì)胞沉淀。

b. 懸浮培養(yǎng)細(xì)胞收集

收集懸浮細(xì)胞,400×g離心5min,棄上清,適量冰PBS溶液將離心后細(xì)胞沉淀重懸,4℃,400×g 離心5min,棄上清,重復(fù)清洗步驟一次,收集細(xì)胞沉淀。

c. 組織樣本收集

把組織在預(yù)冷的表面上剪切成細(xì)小碎塊,然后用液氮或超低溫冰箱中冷凍組織30min以上,迅速加液氮研磨,研磨過程盡量控制在1~2min之內(nèi),以減少蛋白的降解。

2)總蛋白提取

a. 細(xì)胞/組織裂解:

根據(jù)收集的細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞種類添加適量的裂解液。

例如常規(guī)細(xì)胞沉淀可按照1mL裂解液/107個(gè)細(xì)胞的比例加入相應(yīng)體積的裂解液,加入裂解液后將沉淀吹打混勻。使用細(xì)胞破碎儀超聲樣本,每次超聲時(shí)間4-5s,間隔時(shí)間在5s左右,肉眼觀察,樣本為均一,不粘稠液體即可?;虿捎谜鹗幜呀夥绞竭M(jìn)行,每隔5min將離心管置于渦旋振蕩儀上震蕩10s,裂解20min。

組織碎片可按照0.5mL 裂解液/100mg組織向勻漿器中加入蛋白裂解液,每3min研磨一次,重復(fù)5次,使組織盡量碾碎(裂解液中根據(jù)需要添加或不添加蛋白酶抑制劑)。所有理解過程,務(wù)必在低溫條件下進(jìn)行。

b. 離心:

把裂解好的樣品配平后,將裂解好的樣本置于預(yù)冷的高速冷凍離心機(jī)中,13000×g離心10min,收集上清

c. 蛋白變性:

吸取少量蛋白提取液做蛋白濃度測(cè)定。向剩余的蛋白提取液的離心管中加入對(duì)應(yīng)體積的5× Loading Buffer(最終工作液為1×),待干式恒溫器溫度升至95℃后,將1.5mL離心管插入加熱孔中,95℃加熱變性10min,待液體冷卻后置于-20℃保存。

3)蛋白濃度測(cè)定(BCA法)

a. BCA工作液的配置

根據(jù)樣品數(shù)量,按50體積BCA試劑A加入1體積BCA試劑B50:1)配置適量BCA工作液,充分混勻。BCA工作液室溫24h內(nèi)穩(wěn)定。

b. BSA標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋

10μl蛋白標(biāo)準(zhǔn)品(5 mg/mL BSA)稀釋至50μl,使終濃度為1mg/ml。稀釋后的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品可以-20℃長(zhǎng)期保存。此標(biāo)準(zhǔn)品溶液的稀釋液可使用去離子水或1×PBS。將標(biāo)準(zhǔn)品按01、24、8、1216、20μl加入到96孔板中,加稀釋液補(bǔ)足到20μl

c. 樣本濃度測(cè)定

加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中,如果樣本不足20μl,需加稀釋液補(bǔ)足到20μl。每孔加入 200μl BCA工作液,37℃放置20-30min。用酶標(biāo)儀測(cè)定樣本和標(biāo)準(zhǔn)品在562nm下的吸光度,或在540-595nm之間波長(zhǎng)下的吸光度。根據(jù)BSA蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線和使用的樣品體積計(jì)算出樣品的蛋白濃度。

2、凝膠電泳

1)制膠器安裝

根據(jù)使用說明書安裝。

2)凝膠配置

根據(jù)目標(biāo)蛋白大小,選擇不同合適濃度的分離膠(見附表)。注意該過程注意不能有氣泡產(chǎn)生。

3)上樣

待膠凝固好后,用移液器吸取樣品垂直梳孔上樣,建議總蛋白上樣量25ug/孔。注意內(nèi)槽Tris-Glycine SDS Running Buffer需注滿,外槽Tris-Glycine SDS Running Buffer沒過底部3~5cm即可。

4)電泳

上樣完成后,連通電泳儀電源,注意正負(fù)極需連接正確,設(shè)定適宜的電泳參數(shù)。建議濃縮膠電泳參數(shù)為恒壓80V,分離膠采用恒壓120V。當(dāng)溴酚藍(lán)電泳到凝膠底部時(shí),停止電泳,關(guān)閉電泳儀電源。

3、轉(zhuǎn)膜

1)準(zhǔn)備工作

a. 轉(zhuǎn)膜緩沖液可提前2h (即開始電泳后)放入-20℃冰箱預(yù)冷。

b. 根據(jù)膠的面積大小,將濾紙以及NC膜剪裁至合適尺寸。

c. 建議目的蛋白大于20KD可選擇0.45μm NC膜;目的蛋白小于20KD可選擇0.2μmNC膜或0.22μmPVDF膜。選擇完畢后將膜放在Western Transfer Buffer中浸泡備用。注意使用PVDF膜需先放入甲醇中浸泡1min左右至均勻浸透,沒有白點(diǎn)即可放入Western Transfer Buffer中浸泡備用。

2)轉(zhuǎn)膜

根據(jù)目的蛋白大小,選擇合適的轉(zhuǎn)膜條件(見附表)。

4、封閉

轉(zhuǎn)膜完成后,將膜取出,放入合適的抗體孵育槽中,加入Western Blocking Buffer 室溫孵育1h,加入TBST Buffer洗滌3次,每次5 min

5、抗體孵育

根據(jù)所使用的一抗種類,選擇進(jìn)行下述其中1項(xiàng)的具體步驟

1)對(duì)于無偶聯(lián)的一抗

a. 將一抗用Western Antibody Dilution Buffer(RK05743)按照抗體說明書推薦比例進(jìn)行稀釋,室溫孵育1.5h4℃過夜孵育。

b. TBST Buffer洗滌4次,每次5 min。

c. 按一抗來源選取合適的HRP偶聯(lián)二抗,按照合適比例進(jìn)行稀釋,室溫孵育1h。

d. TBST Buffer洗滌4次,每次5 min。

e. 繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)曝光操作。

2)對(duì)于偶聯(lián)有HRP的一抗

a. 將一抗用Western Antibody Dilution Buffer(RK05743)按照抗體說明書推薦比例進(jìn)行稀釋,室溫孵育1.5h4℃過夜孵育。

b. TBST Buffer洗滌4次,每次5 min。

c. 繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)曝光操作。

6、曝光

a. 吸取等體積ECL SolutionⅠ和SolutionⅡ混勻,配制成發(fā)光檢測(cè)工作液。推薦用量為每10cm2的膜使用1-2 mL發(fā)光檢測(cè)工作液即可。

b. 用鑷子將膜取出,膜的下緣輕輕接觸吸水紙,去除膜上多余的液體。用移液槍吸取工作液并均勻覆蓋轉(zhuǎn)印膜,室溫孵育 1-2 minutes,此步驟可在潔凈保鮮膜上或塑料盒中完成。

c. 獲取WB結(jié)果:

1) 傳統(tǒng)壓片曝光顯影:將膜固定于片夾內(nèi)。暗室內(nèi)壓片1分鐘,立即顯影定影,根據(jù)結(jié)果再調(diào)整壓片時(shí)間獲取最佳信噪比圖片。或直接分別壓片 30 秒、13、5分鐘,然后一起顯影定影觀察結(jié)果。

2) 化學(xué)發(fā)光成像儀獲取電子圖片:將膜放置到成像儀內(nèi),參考儀器說明書設(shè)置合適的參數(shù)以獲取優(yōu)化圖片。同時(shí)應(yīng)根據(jù)靶蛋白的生物學(xué)性質(zhì)如豐度等來調(diào)節(jié)成像參數(shù)。

歡迎訂購(gòu):

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

A20607

SARS-CoV-2 N蛋白多抗

50 µl

100 µl

200 µl

 

天津益元利康生物科技有限公司現(xiàn)貨供應(yīng)abclonal愛博泰克SARS-CoV-2 N蛋白多抗(A20607),歡迎選購(gòu)!

 image.png

 


掃一掃,關(guān)注微信
地址:天津市經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)洞庭湖路220號(hào) 傳真:
版權(quán)所有 © 2024 天津益元利康生物科技有限公司  備案號(hào):津ICP備2022004463號(hào)-1

聯(lián)


微博| 长春市| 合川市| 盈江县| 福贡县| 沧州市| 张北县| 汕头市| 镇坪县| 定兴县| 宁德市| 出国| 邮箱| 合阳县| 五华县| 新源县| 资溪县| 哈尔滨市| 南澳县| 长子县| 九江市| 玛曲县| 临潭县| 淮北市| 亳州市| 新昌县| 肥乡县| 平原县| 巴塘县| 苏州市| 油尖旺区| 普洱| 玛沁县| 芜湖市| 泰来县| 郯城县| 福建省| 博兴县| 汉川市| 文登市| 平武县|