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NEB Q5定點突變試劑盒-不含感受態(tài)細(xì)胞(E0552S)產(chǎn)品介紹

 更新時間:2024-04-08    點擊量:454

產(chǎn)品名稱:NEB Q5定點突變試劑盒-不含感受態(tài)細(xì)胞(E0552S)現(xiàn)貨供應(yīng)

產(chǎn)品貨號:E0552S

產(chǎn)品品牌:NEB

產(chǎn)品簡介:

Q5定點突變試劑盒(不含感受態(tài)細(xì)胞)可以在2小時內(nèi)快速對雙鏈質(zhì)粒DNA進(jìn)行定點突變。該試劑盒使用穩(wěn)定的Q5熱啟動超保真DNA聚合酶,結(jié)合客戶自行設(shè)計的引物,在各種質(zhì)粒中引入插入、缺失和替換突變。PCR后將擴(kuò)增材料直接添加到du特的激酶-連接酶-DpnI(KLD)酶混合液中,進(jìn)行快速室溫環(huán)化和模板去除(5分鐘)。將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到高效級E.coli感受態(tài)細(xì)胞(不隨試劑盒提供),以確保轉(zhuǎn)化長度至少為20kb的質(zhì)粒能獲得穩(wěn)定的結(jié)果。也提供含感受態(tài)細(xì)胞的試劑盒

實驗數(shù)據(jù):

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使用預(yù)混液、du特的多酶 KLD 酶混合液和快速聚合酶可確保大多數(shù)質(zhì)粒的突變反應(yīng)在兩小時內(nèi)完成。

注意事項:

1.如果得到的質(zhì)粒不包含所需的突變(野生型序列),建議在PCR步驟中使用≤10ng的模板。另外,也可將KLD溫育時間延長至30-60分鐘來減少野生型質(zhì)粒的背景。

2.如果沒有菌落或菌落很少,請確保引物設(shè)計正確。除引入缺失外,設(shè)計的兩條引物的5′末端應(yīng)背靠背對齊,以利于進(jìn)行指數(shù)擴(kuò)增。為得到最佳結(jié)果,推薦使用NEB在線引物設(shè)計軟件NEBaseChanger™設(shè)計引物并計算退火溫度。

3.如果沒有PCR產(chǎn)物或產(chǎn)物很少,請確保使用了最佳退火溫度(Ta)。高保真聚合酶適合Tm+3退火溫度。使用NEB在線引物設(shè)計軟件NEBaseChanger™計算Ta。另外,可以使用梯度PCR和瓊脂糖凝膠分析來確定最佳退火溫度。

產(chǎn)品選購:

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

E0552S

定點突變試劑盒(不含感受態(tài)細(xì)胞)

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