細胞凍存是指將細胞放在低溫環(huán)境，以達到減少細胞代謝的作用，從而達到對細胞進行長期儲存進行保種的目的，以供后續(xù)實驗或臨床使用。那么你知道細胞凍存的原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧！

一、細胞凍存原理

1. 當(dāng)溫度低至-70℃時，細胞內(nèi)的酶活性全部停止，代謝活動停止，故實現(xiàn)長期保存的目的。

2. 隨著溫度降低，細胞內(nèi)外的水分都會結(jié)晶，所形成的冰晶會造成細胞膜和細胞器的破壞，從而引起細胞死亡，特別是0~-20℃的階段，冰晶呈針狀，及其引發(fā)細胞損傷。在不加任何保護劑條件下直接凍存細胞時，細胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會形成冰晶，能導(dǎo)致細胞內(nèi)發(fā)生機械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、pH改變、蛋白變性等，能引起細胞死亡。

3. 常見的冷凍保護劑是甘油或二甲基亞砜（DMSO）。DMSO能快速穿透細胞膜進入細胞，降低冰點，延緩凍存過程，同時增加細胞膜的通透性，提高細胞內(nèi)離子濃度，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而達到保護細胞的目的。

二、保護劑的選擇

1. 細胞凍存中， 一般使用DMSO 作為保護劑。在細胞凍存中， DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ，某種具體細胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。

2. 對特別敏感的細胞在凍存時需測試適用的凍存液。例如神經(jīng)元細胞凍存時需選擇無血清凍存液，避免復(fù)蘇后分化。

三、細胞凍存的最佳時期

1. 用來凍存的細胞一般選擇在細胞對數(shù)生長期，匯合度約 90% 的時候，這時細胞生長狀態(tài)好，細胞數(shù)量也多，并且在收獲細胞前 24 小時換一次培養(yǎng)液。

2. 對培養(yǎng)物進行微生物污染物檢測，特別是支原體，確保細胞沒有任何的污染。在細胞的收集過程中，實驗操作要盡可能的溫和，避免細胞受損。

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