蛋白純化是指通過基因工程技術將編碼蛋白的核酸序列導入到宿主細胞，使其大量表達，再使用適當?shù)募兓椒▽⑵湓隗w外純化出來，從而獲得高純度、活性和產(chǎn)量的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)表達系統(tǒng)可以分為原核表達系統(tǒng)和真核表達系統(tǒng)兩大類。那么你知道蛋白質(zhì)純化的原理是什么嗎？讓我們一起來看看吧！

一、乳糖操縱子的負調(diào)控

在沒有乳糖存在時，lac操縱子處于阻遏狀態(tài)，此時，I序列表達Lac阻遏蛋白與O序列結(jié)合，阻礙RNA聚合酶與P序列結(jié)合，抑制轉(zhuǎn)錄啟動。當有乳糖存在時，乳糖進入細胞，經(jīng)β-半乳糖苷酶催化，轉(zhuǎn)變?yōu)楫惾樘牵惾樘墙Y(jié)合阻遏蛋白，使蛋白構(gòu)象變化，導致阻遏蛋白與O序列解離，從而啟動轉(zhuǎn)錄。

異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）的作用與異乳糖相同，是一種作用ji強的誘導劑，不被細菌代謝而十分穩(wěn)定，因此被實驗室廣泛應用。

二、宿主菌株的選擇

（1）BL21是zui常用于原核表達的菌株之一，主要適用于非毒性蛋白的表達，具有大腸桿菌聚合酶，故可適用于tac或trc等使用大腸桿菌RNA聚合酶的原核系統(tǒng)的表達（如：pGEX，pMAL質(zhì)粒）。

（2）BL21(DE3)在BL21菌株的染色體上整合了λ噬菌體DE3區(qū)的T7噬菌體RNA聚合酶基因，可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的表達。

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