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022-66387942Q:jetPRIME®是哪種類型的化合物?
A:jetPRIME®是由Polyplus-transfection®公司合成的zhuan利產(chǎn)品,一種新型的基于陽離子聚合物的分子。
Q:使用jetPRIME®進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí),質(zhì)粒是如何導(dǎo)入的?
A:jetPRIME®和DNA形成帶正電荷的復(fù)合物。這些復(fù)合物通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。隨后經(jīng)質(zhì)子海綿作用,內(nèi)涵體在細(xì)胞質(zhì)中釋放DNA。當(dāng)有絲分裂過程中核膜消失時(shí),質(zhì)粒大多到達(dá)細(xì)胞核。
Q:我的細(xì)胞比較脆弱,無血清時(shí)不能生長。我可以嘗試在有血清的條件下進(jìn)行轉(zhuǎn)染嗎?
A:與許多其他轉(zhuǎn)染試劑相反,在有血清的環(huán)境下,jetPRIME®的效率更高。因此,轉(zhuǎn)染復(fù)合物可以直接加到含血清培養(yǎng)基的細(xì)胞中。
無血清培養(yǎng)基:Opti-MEM培養(yǎng)基(thermo)
Lipo2000,轉(zhuǎn)染時(shí)需要更換培養(yǎng)為Opti-MEM;需要用Opti-MEM復(fù)合物,轉(zhuǎn)染6小時(shí)后需要換液。對細(xì)胞毒性大。
Lipo3000, 轉(zhuǎn)染時(shí)需要更換培養(yǎng)為Opti-MEM;需要用Opti-MEM復(fù)合物,轉(zhuǎn)染6小時(shí)后無需換液。跟lipo2000相比,毒性小。
抗生素問題:
jetPRIME®的轉(zhuǎn)染效率不受抗生素的影響。jetPRIME的常規(guī)批次質(zhì)檢都是在含血清和抗生素的培養(yǎng)基中進(jìn)行的。
細(xì)胞密度問題:
細(xì)胞密度和傳代次數(shù)將影響轉(zhuǎn)染效率。推薦細(xì)胞融合度在60%-80%。對于使用jetPRIME的轉(zhuǎn)染優(yōu)化條件,請參考jetPRIME®轉(zhuǎn)染說明書中的Table 1,根據(jù)不同培養(yǎng)板推薦的細(xì)胞數(shù)。此外,如果細(xì)胞已經(jīng)培養(yǎng)很長時(shí)間(超過20代),建議從液氮中取新的細(xì)胞重新培養(yǎng)。
比值問題:
Q:DNA/jetPRIME®的比值是什么意思?
A:該比值指的是每微克(ug)DNA相對應(yīng)的jetPRIME微升數(shù)(uL)。例如,DNA/jetPRIME®比值為1:2意思是每ug DNA加2uLjetPRIME.
優(yōu)化的問題:
優(yōu)化的第一步是將DNA的量增加1.5倍。推薦增加DNA/jetPRIME®比值(每ug的DNA,2-3uLjetPRIME®), 另一種方法是緩慢離心培養(yǎng)板(5min,210g)
擴(kuò)大的問題:
一般來說,DNA的量應(yīng)該和總細(xì)胞數(shù)成比例。參考jetPRIMEprotocol中的推薦,根據(jù)不同規(guī)格的培養(yǎng)皿,所需要的DNA和jetPRIME的量(Table 2)
細(xì)胞特異性問題:
Q:對于所有細(xì)胞可以使用同樣的條件嗎?
A:已優(yōu)化的操作步驟可用于多種細(xì)胞,例如A549, MCF7,U2OS, NIH-3T3, B16-F10, Caco-2等。更多細(xì)胞的優(yōu)化條件,請咨詢客服!
HEK-293和HeLa細(xì)胞問題:
Q:HEK-293和HeLa細(xì)胞:是否可以提供使用jetPRIME轉(zhuǎn)染HEK-293和HeLa細(xì)胞的具體建議?
A:jetPRIME對于DNA轉(zhuǎn)染HEK-293 和HeLa細(xì)胞都是非常高效的。因此,推薦減少DNA的量(例如6孔板,每孔1ug-0.5ug),使用1:2的DNA和jetPRIME比例。
懸浮細(xì)胞問題:
Q:jetPRIME®推薦用于懸浮細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染嗎?
A:懸浮細(xì)胞,例如T和B淋巴細(xì)胞是眾suo周知的難轉(zhuǎn)染DNA細(xì)胞,無論哪種化學(xué)方法的試劑都很難有較好的轉(zhuǎn)染效率。因此,通常推薦電轉(zhuǎn)或者病毒轉(zhuǎn)染核酸到懸浮細(xì)胞。
植物細(xì)胞問題:
Q:jetPRIME®是否測試過可以用于植物細(xì)胞的轉(zhuǎn)染?
A:植物細(xì)胞富含纖維素的膜阻止了jetPRIME/DNA復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞。甚至在脫去纖維素的原生質(zhì)體階段,復(fù)合物也無法穿透進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)。
HUVEC(人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞)問題:
Q:jetPRIME®對HUVEC的DNA轉(zhuǎn)染是否有效?
A:對于HUVEC細(xì)胞,推薦使用jetPEI®-HUVEC,專為該細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染設(shè)計(jì)的特異性轉(zhuǎn)染試劑。可以用jetOPTIMUS替代。
原代神經(jīng)元問題:
Q:對于原代培養(yǎng)的神經(jīng)元,可以使用jetPRIME®嗎?
A:神經(jīng)元很難轉(zhuǎn)染,主要是因?yàn)槠湓谂囵B(yǎng)的過程中不分裂。然而,jetPEI®已被成功用于神經(jīng)元的體外轉(zhuǎn)染。
巨噬細(xì)胞問題:
Q:對于DNA轉(zhuǎn)染巨噬細(xì)胞,jetPRIME的轉(zhuǎn)染效率如何?
A:jetPRIME已成功用于Raw264.7的轉(zhuǎn)染。按照standard condition,可以獲得50%的轉(zhuǎn)染效率;對于原代巨噬細(xì)胞或單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞衍生的巨噬細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染,應(yīng)選擇jetPEI-macrophage??梢杂?/span>jetOPTIMUS替代
質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染問題:
Q:當(dāng)我想在一個(gè)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行多個(gè)質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染時(shí),我該如何操作?
A:對于多個(gè)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染,每孔DNA的總量不應(yīng)超過說明書中標(biāo)明的DNA量。每個(gè)質(zhì)粒的比例根據(jù)質(zhì)粒的大小、結(jié)構(gòu)和期望的每個(gè)質(zhì)粒的表達(dá)水平來應(yīng)用。在每孔中,每個(gè)質(zhì)粒至少應(yīng)占總DNA量的10%。
復(fù)合物問題:
Q:jetPRIME®/DNA復(fù)合物可以穩(wěn)定多長時(shí)間?
A:復(fù)合物形成的15-30分鐘內(nèi)是獲得最佳轉(zhuǎn)染效率的時(shí)間。因此,對于需要較長孵育時(shí)間的高通量篩選,推薦使用jetPEI進(jìn)行HTS, 因?yàn)?/span>jetPEI®/DNA復(fù)合物可以穩(wěn)定長達(dá)4小時(shí)。
病毒包裝問題:
Q:jetPRIME®是否適用于病毒包裝?
A:jetPRIME®可以用在傳統(tǒng)培養(yǎng)基中進(jìn)行病毒包裝。實(shí)際上,在用于病毒包裝的常規(guī)細(xì)胞中,使用jetPRIME®的轉(zhuǎn)染效率可達(dá)90%,例如HEK-293及其衍生株,CHO, VERO,WOP和BHK細(xì)胞,因此會(huì)產(chǎn)生高病毒滴度(Dewannieux,M., Vernochet, C., Bartoscho, B., Cosset, F.L., Heidmann, T (2011).The mouseIAPE endogenous retrovirus can infect cells through any of the fiveGPI-anchored Ephrin A proteins., PLoS Pthog 7, e1002).
細(xì)胞活性問題:
Q:如何提高脆弱細(xì)胞的細(xì)胞活性(例如,原代成纖維細(xì)胞)?
A:轉(zhuǎn)染對于細(xì)胞來說是創(chuàng)傷事件。改進(jìn)細(xì)胞活性,可參考以下建議:
-轉(zhuǎn)染后4小時(shí)更換培養(yǎng)基
-減少DNA的量
-減少jetPRIME®的體積
-在含血清的培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染
-轉(zhuǎn)染后24小時(shí)分析轉(zhuǎn)染效率而不是48小時(shí)
-確保使用jetPRIME® buffer稀釋jetPRIME和DNA
-檢測質(zhì)粒不含內(nèi)毒素
質(zhì)粒大小問題:
Q:使用jetPRIME®做DNA轉(zhuǎn)染會(huì)有質(zhì)粒大小的限制嗎?
A:使用jetPRIME®做DNA轉(zhuǎn)染沒有質(zhì)粒大小的限制。然而,記住同樣的DNA量,大質(zhì)粒的基因拷貝數(shù)比小質(zhì)粒少。
siRNA問題:
Q:可以使用jetPRIME®轉(zhuǎn)染siRNA嗎?
A:jetPRIME®完quan可以用于siRNA轉(zhuǎn)染,使用終濃度10-50nm的siRNA。然而,如果您主要感興趣的是siRNA轉(zhuǎn)染,那么試劑INTERFERin®是您的選擇。
保存問題:
Q:jetPRIME®如何保存?
A:jetPRIME®是穩(wěn)定的分子。室溫運(yùn)輸jetPRIME®和它的buffer,為長期保存,應(yīng)儲(chǔ)存在4°C。
加熱問題:
Q:當(dāng)我收到jetPRIME®試劑時(shí),管子完quan是溫的。它是否仍然有效,能否繼續(xù)使用?
A:jetPRIME®是非常穩(wěn)定的分子。已經(jīng)做了測試jetPRIME試劑穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)。jetPRIME®在50°C放置48小時(shí)后,仍表現(xiàn)出和保存在4°C時(shí)相似的轉(zhuǎn)染效率。
冷凍問題:
Q:我不小心凍存了我的jetPRIME®試劑,我該怎么辦?
A:jetPRIME®可以耐受偶爾的冷凍,而不影響轉(zhuǎn)染效率。然而,對于長期保存來說,建議分裝并儲(chǔ)存在4°C,以確保試劑長時(shí)間有效。
有效期問題:
保存適當(dāng)時(shí),jetPRIME®cat#114-01 (0.1mL)可以保存6個(gè)月。其他規(guī)格的jetPRIME®至少可以保存1年。
參考文獻(xiàn)問題:
Q:我在哪里可以找到科研人員已成功使用jetPRIME®發(fā)表的文章?
A:在Polyplusproduct citation database,可以找到引用jetPRIME和Polyplus-transfection公司其他試劑的科研論文。
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